18-3박테리오파지의 정량에는 한천중첩법을 이용한 플라크계수법이 쓰인다… | 2018년 식품안전기사실기(필답형) 3회차 기출문제 상세 페이지

(1) 파지가 숙주세균에 감염·증식하면서 균을 녹여, 한천배지 위에 고르게 자란 균막에 생긴 투명한 원형의 용균 자국

(2) 시료를 단계희석해 숙주세균 배양액과 섞어 감염시킨 뒤 연한천에 풀어 한천평판 위에 중첩·배양하고, 생긴 플라크 수에 희석배수를 곱해 원액의 파지 농도(PFU/mL)를 구한다.

[해설]

파지는 세균보다 훨씬 작아 현미경으로 직접 세기 어렵다. 그래서 파지 한 입자가 만들어 낸 눈에 보이는 흔적을 세는 간접 정량법을 쓴다.

한천중첩법(이중한천평판법)의 순서는 다음과 같다.

① 파지 시료를 완충액으로 10배씩 단계희석한다.

② 희석액 일정량을 대수증식기의 숙주세균 배양액과 섞어 잠시 두어 파지를 흡착·감염시킨다.

③ 이 혼합액을 따뜻하게 녹인 묽은 연한천에 붓고 잘 섞은 뒤, 이미 굳혀 둔 기층 한천평판 위에 부어 얇게 중첩시켜 굳힌다.

④ 배양하면 감염되지 않은 숙주세균이 연한천층에서 자라 뿌옇게 균막(lawn)을 이루고, 파지가 들어간 자리에서는 용균이 이웃 세포로 번져 투명한 플라크가 생긴다.

⑤ 플라크가 서로 겹치지 않고 셀 수 있을 만큼 나온 평판을 골라 수를 세고, 접종량과 희석배수로 환산한다.

$\text{파지 농도}(\mathrm{PFU/mL})=\dfrac{\text{플라크 수}\times\text{희석배수}}{\text{접종량}(\mathrm{mL})}$

플라크 하나는 원칙적으로 감염력을 가진 파지 한 입자에서 비롯되므로, 균수를 CFU(집락형성단위)로 나타내듯 파지 농도는 PFU(plaque forming unit, 플라크형성단위)로 나타낸다. 파지의 종류·숙주에 따라 플라크의 크기와 가장자리 모양이 달라 균주 판별(파지형별)에도 이용된다.