20-3고성능 액체크로마토그래피(HPLC)의 역상(reverse pha… | 2020년 식품안전기사실기(필답형) 3회차 기출문제 상세 페이지

· 고정상 — 비극성(소수성)

· 이동상 — 극성(친수성)

[해설]

액체크로마토그래피는 고정상과 이동상의 극성 관계에 따라 순상과 역상으로 나뉜다.

· 순상(normal phase): 극성 고정상(실리카, 아미노·시아노 결합상) + 비극성 이동상(헥세인 등)

· 역상(reverse phase): 비극성 고정상(실리카에 옥타데실기 C18, 옥틸기 C8 등 탄화수소 사슬을 결합한 충전제) + 극성 이동상(물, 메탄올, 아세토나이트릴의 혼합액)

이름이 '역상'인 것은 원래 쓰이던 순상과 극성 관계가 뒤집혀 있기 때문이다. 오늘날 식품 분석의 대부분은 물과 섞이는 시료를 다루므로 역상이 표준으로 쓰인다.

용출 순서는 시료 성분과 고정상 사이의 소수성 상호작용으로 결정된다. 역상에서는 비극성 고정상에 잘 붙는 비극성(소수성) 성분일수록 늦게 나오고, 고정상에 잘 붙지 않는 극성(친수성) 성분이 먼저 용출된다. 일부 교재에 '극성인 이동상이 먼저 용출된다'로 적혀 있으나, 이동상은 처음부터 끝까지 계속 흐르는 용매이므로 용출 순서를 따지는 대상이 아니다. 먼저 나오는 것은 이동상이 아니라 극성 성분이다.

이동상의 유기용매 비율을 높이면 이동상이 덜 극성이 되어 소수성 성분을 더 잘 끌고 나오므로 머무름시간이 짧아진다. 분석 도중 이 비율을 바꿔 가며 용출력을 조절하는 방식이 기울기(gradient) 용리이다.