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병징이나 표징을 보고 진단하는 방법

- 병든 부분을 해부하여 조직 속의 이상현상이나 병원체를 존재 여부를 밝히는 방법

- 기주 식물의 병환부를 해부하여 병원체의 침입 및 기주 식물의 세포 내 감염과 기관의 변화 등을 관찰하여 병원체의 존재 여부를 현미경을 통해 확인함

- 병원체와 기주 식물의 상호반응을 보며 세포 내에 형성되는 물질의 특성을 관찰하여 식물병 진단

대부분의 식물병원균은 그람음성으로, 그람염색법을 이용해 감자둘레썩음병 등 염색해 관찰하는 방법 (세균성 진단)

바이러스 감염여부를 1차적으로 검정하는데 유효하여 바이러스에 감염된 잎을 염색해 관찰하는 방법

바이러스 감염 조직으 아주 얇게 잘라 전자현미경으로 관찰

기주 식물의 감염된 잎의 조직을 고정, 초박절편 한 후 세포 내 바이러스의 입자 및 봉입체 존재 여부를 전자현미경으로 관찰하여 바이러스 동정에 활용

기주 식물 병원체의 형태 및 혈청반응을 전자현미경을 통해 관찰하는 방법

혈청반응을 전자현미경으로 관찰, 반응 민감도가 높고 병원체의 형태와 혈청반응을 동시에 관찰

특이한 병원체의 연구용 진단에 활용

병원체를 분리・배양・접종해서 병원성을 확인하는 방법 → 코흐의 법칙

1. 병원체는 반드시 병환부에 존재할 것

2. 병원체는 배지 상에서 순수배양 되어야 할 것

3. 병원체를 건전 기주에 접종해서 동일한 병을 발생시킬 것

4. 접종한 기주로부터 같은 병원체를 재분리 할 수 있을 것 (절대기생체는 적용하기 어려움)

- 기주 식물의 병환부를 물리적 또는 화학적인(이화학적인) 방법으로 검사하여 진단하는 방법

- 병원체와 기주 사이의 반응을 조사하는 간접적인 진단 방법

- 감자 바이러스병 진단 시 감염된 즙액에 황산구리를 첨가해 즙액의 착색도와 투명도를 검사하여 바이러스 감염 여부를 진단하는 황산구리법

- 감자둘레썩음병은 감자에 루미플라빈에 의해 감염부위가 형광색을 나타나게 됨. 자외선의 반응을 통해 씨감자의 감염여부 진단

- 항혈청을 이용한 진단법으로 병든 식물에서 분리한 병원균에 대한 항혈청을 만든 다음 이것을 진단하려는 식물 즙액이나 분리한 병원체오 반응시켜 이미 알고 있는 병원체와 같은 것인지를 조사하는 방법

- 바이러스 진단에 많이 사용되었으나, 최근에는 진균 및 세균 진단에도 많이 사용함

- 면역학적 진단의 가장 큰 장점은 특이성과 신속성에 있으며, 병원균이 기주체 내에 잠복감염 되었거나 변이가 일어난 균을 정확하게 진단하는 것이 가능함

- 면역학적 진단법의 종류: 응집과 침강반응 / 면역확산법(한천이중확산법) / IF법 / 면역효소항체법(ELISA법)

슬라이드 위에서 항혈청과 병원체를 혼합시켜 응집 반응 조사

한천겔에 항원과 항체를 확산시켜 만들어진 침강반응을 관찰하는 방법

간이 검출 진단에 활용

형광색소를 함유한 항체를 항원과 결합시켜 형광현미경으로 혈청반응을 조사하는 방법

종자 표면의 바이러스, 매개충 체내의 바이러스, 토양 중의 세균 검출 및 확인에 이용함

병원균에 감염된 식물 조직의 단면을 염색액과 항혈청에 반응시킨 다음 발색시켜 결과를 판정 → 민감성, 수월성, 신속성, 정확성이 뛰어나고 대량처리가 가능함

식물체에 적혈구를 처리했을 때 바이러스 등 세포응집소나 항체에 의해서 적혈구가 응집되는 현상을 이용하는 방법

항체에 효소를 결합시켜 바이러스와 반응했을 때 노랑색이 나타나는 정도로 바이러스 감염 여부를 확인

1차 항체와 이에 특이성을 나타난 효소를 결합시킨 효소결합항체를 항원에 처리한 후 형성된 색소의 발색 정도를 분광광도계로 측정하는 조사 방법 → 감염 여부, 감염량 판단 가능

세균 바이러스를 세균 파지와 혼합하여 그 파지의 감염성을 중화시켜 활성화를 없앰으로써 파지의 종류를 동정할 때 활용

효소표식항체법(ELISA법), 형광항체반응법, 바이러스(파지)중화반응법

- 지표식물에 의한 진단

- 특정의 병원체에 감수성인 지표식물을 병의 진단에 이용한 진단법

- 최아법에 의한 진단

- 싹을 틔워서 병징을 발현시켜 발병 유무를 진단

- 박테리오파지에 의한 진단

- 즙액 접종법

- 혐촉반응에 의한 진단

- 유전자에 의한 진단

- 뉴클레오티드의 GC 함량, DNA-DNA 상동성 및 리보솜 RNA의 염기배열

- 식물병원균의 진단과 동정에 DNA를 이용하는 방법

- 병원균에서 DNA를 추출한 후 PCR(중합효소연쇄반응)을 이용하여 특정 유전자 또는 DNA 부위를 증폭하여 DNA 데이터베이스의 유전자 또는 DNA 염기서열과 비교하여 병원균을 동정함

- 장점: 병원체의 분리와 배양이 어려운 경우나 병징 발현이 없는 잠복기 병원균의 동정에도 유용하게 쓰이고 있으며, 다른 수목병의 진단 방법에 비해 효율적이고 정확하게 식물병원균을 진단할 수 있음

- 단점: 데이터베이스에 염기서열 등록 시 검증 절차가 부족하여 병원균 동정에 오류가 생길 수 있고, 데이터베이스에 등록되어 있지 않은 신종병원균의 경우 동정의 어려움이 있음

- 역전사 중합효소 연쇄반응 (RT-PCR)

- PAGE 분석법

- 소량의 핵산을 RT-PCR에 의해 대량으로 증폭하는 것이 가능해짐에 따라 이를 이용한 바이러스 동정이 가능하게 됨

- 핵산증폭기를 이용해 인공적으로 바이러스의 특정 핵산을 튜브 내에서 대량으로 증폭시킨 후 전기영동법에 의해 바이러스의 감염여부를 확인함

- 극소량의 핵산시료만 있어도 동정 가능

기주, 병원체, 환경

- 소인 (기주의 감수성): 병원체에 대한 감수성, 수령(성숙도), 식재장소, 환경요인, 식재거리

- 주인 (병원체, 병원성): 병원력과 밀도, 병원력이 상승하면 밀도도 상승

- 유인 (환경조건): 온도, 햇빛, 습도, 바람, 지형, 대기오염, 산림조건

- 시간: 병원체에 유리한 환경이 지속되는 기간

- 인간활동: 특정 기주품종을 재배, 병원체를 방제하는 처리, 식물의 재배환경 조절, 병원체를 전파시키는 매체가 되어 병발생에 관여

- 선형모형 이론 (유효적산온도, 발육단계 예측, 적산온도모형)

- 다른 생물 현상과의 관계 이용 (식물의 개화기를 곤충의 발생시기와 연관하여 예찰)

- 생명표 이용 (암컷 1마리당 산란수를 이용 성충까지의 발육단계 연령 등급화

- 기타방법 (온도, 강우량, 일조시간과의 관계를 이용해서 예찰)